農藥殘留試劑盒

農藥殘留試劑盒

ELISA試劑盒檢測原理：

試劑盒采用(yong)雙抗體一步夾心法(fa)酶聯免疫(yi)吸附(fu)試驗（ELISA）。往預先(xian)包被（Aflatoxin）抗體的(de)(de)包被微(wei)孔中，依次加入標(biao)(biao)(biao)本、標(biao)(biao)(biao)準(zhun)品(pin)(pin)、HRP標(biao)(biao)(biao)記的(de)(de)檢(jian)測抗體，經過(guo)溫育并*洗(xi)滌。用(yong)底物(wu)TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧化物(wu)酶的(de)(de)催(cui)化下轉化成(cheng)藍色(se)，并在酸的(de)(de)作用(yong)下轉化成(cheng)終的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和樣品(pin)(pin)中的(de)(de)（Aflatoxin）呈正相關(guan)。用(yong)酶標(biao)(biao)(biao)儀在450nm 波長下測定吸光(guang)度（OD 值(zhi)），計算樣品(pin)(pin)濃度。

樣(yang)品收集、處理(li)及保(bao)存(cun)方法：

1.  血清：使(shi)用不(bu)含熱原和內毒素的試管，操作過(guo)程中避(bi)免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小(xiao)心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)肝素抗(kang)凝。3000轉(zhuan)離心30分鐘取上(shang)清。

3.  細(xi)胞(bao)上清(qing)液：3000轉離心10分鐘去除顆(ke)粒和聚合物(wu)。

4.  組織勻漿(jiang)：將組織加入適(shi)量(liang)生理鹽(yan)水搗碎。3000轉離心10分鐘取(qu)上清(qing)。

5.  保(bao)(bao)存：如(ru)果樣(yang)本收(shou)集后不及時檢測，請按一(yi)次用量分(fen)裝，凍(dong)存于-20℃，避免反(fan)復凍(dong)融，在室(shi)溫下解(jie)凍(dong)并確保(bao)(bao)樣(yang)品均勻地充分(fen)解(jie)凍(dong)。

自備物品

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣(yang)器及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒(heng)溫箱

ELISA試劑盒操作注意事項：

1、試劑盒保存在2-8℃，使(shi)用前室溫(wen)平衡20分鐘(zhong)。從冰箱取出的濃縮洗滌(di)液會有(you)結晶(jing)，這屬(shu)于正常現象(xiang)，水浴加熱使(shi)結晶(jing)*溶解后再使(shi)用。

2、實驗中不用的板條(tiao)應(ying)立即放(fang)回(hui)自封袋中，密封（低溫(wen)干燥）保存(cun)。

3、濃度(du)(du)為(wei)0的S0號(hao)標(biao)準(zhun)品即可視(shi)為(wei)陰性對(dui)照或者空白；按(an)照說明書操作時樣本(ben)已經(jing)稀釋5倍，終結果乘以5才(cai)是樣本(ben)實際濃度(du)(du)。

4、嚴格按照說明(ming)(ming)書中標明(ming)(ming)的時間、加液量(liang)及順序進行溫育(yu)操作。

5、所(suo)有(you)液體組分使用(yong)前充分搖勻。

試劑盒組成：

注：標準品（S0-S5）濃度(du)依次為：0、2.5、5、10、20、40 ppb

試劑的準備：

20×洗滌緩沖液(ye)的(de)稀釋：蒸餾(liu)(liu)水按(an)1：20稀釋，即1份的(de)20×洗滌緩沖液(ye)加19份的(de)蒸餾(liu)(liu)水。

洗板方(fang)法：

1.手工(gong)洗板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，每孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)1min后甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，在吸水紙上拍干(gan)，如此洗板(ban)5次。

2.自動(dong)洗板(ban)機(ji)：每孔(kong)注入(ru)洗液350μL，浸泡1min，洗板(ban)5次(ci)。

操作步驟：

1.從室溫(wen)平衡20min后的鋁箔(bo)袋(dai)中取出所需板條，剩余板條用自封(feng)袋(dai)密封(feng)放回4℃。

2.設置標準品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)，標準品孔(kong)各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔先加(jia)待測(ce)樣本10μL，再(zai)加(jia)樣本稀釋液40μL；空白孔不加(jia)。

4.除(chu)空(kong)白孔(kong)外，標準品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加入辣根過(guo)氧(yang)化物(wu)酶（HRP）標記(ji)的檢(jian)測抗體100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去(qu)液(ye)體，吸水紙上(shang)拍(pai)干(gan)，每孔加滿洗(xi)(xi)滌(di)(di)液(ye)，靜置(zhi)1min，甩去(qu)洗(xi)(xi)滌(di)(di)液(ye)，吸水紙上(shang)拍(pai)干(gan)，如此重復洗(xi)(xi)板5次（也可用(yong)洗(xi)(xi)板機洗(xi)(xi)板）。

6.每孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵育(yu)15min。

7.每孔加入(ru)終(zhong)止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處測(ce)定各孔的OD值。

結果判斷：

繪制(zhi)標(biao)準曲(qu)線：在Excel工作表(biao)中，以標(biao)準品濃(nong)度作橫坐(zuo)標(biao)，對應(ying)OD值作縱坐(zuo)標(biao)，繪制(zhi)出標(biao)準品線性回(hui)歸(gui)曲(qu)線，按曲(qu)線方程計算各(ge)樣本濃(nong)度值。

試劑盒性能：

1.準確性：標(biao)準品線性回歸與預(yu)期濃(nong)度相關系數R值，大于等于0.9900。

2.靈敏(min)度：檢測濃度小于1.0 ppb。

3.特異(yi)性：不與其它可溶性結構(gou)類似物交(jiao)叉(cha)反(fan)應。

4.重復性(xing)：板內、板間變異系數均小(xiao)于15%。

5.貯藏：2-8℃，避光防潮(chao)保存。

6.有效(xiao)期：6個月

免責聲明：

試劑(ji)盒(he)僅供研究使用，不得用于臨床實(shi)(shi)驗(yan)或人體(ti)實(shi)(shi)驗(yan)，否則所產生(sheng)的一(yi)切(qie)后(hou)果，由實(shi)(shi)驗(yan)者承(cheng)擔，本(ben)公司概(gai)不負責。

嚴格(ge)按照說明(ming)書操(cao)作，實(shi)驗(yan)者(zhe)(zhe)違反說明(ming)書操(cao)作，后果由實(shi)驗(yan)者(zhe)(zhe)承(cheng)擔。